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雷鋒網按：當基因檢測變得越來越普及，所得數據越來越多，對數據解讀的需求也由此誕生，而這就是生物信息技術的作用。本文整理自華點云技術總監于偉文在雷鋒網硬創公開課上的演講，主題為如何用云計算模式實現生物信息分析。
于偉文，高級工程師，上海華點云生物科技有限公司技術總監。是北京航空航天大學國家示范學科——“移動云計算”專業的首批畢業生。擁有十余年 IT 領域從業經驗，主要關注于臨床、生物、金融等領域。作為課題負責人，曾主持過國家“十一五” 重大專項子課題；參與多項國家自然科學基金、國家重點實驗室專項信息化建設項目。在Nature 子刊、SCI等權威刊物上發表學術論文10 余篇。
公開課視頻如下：
以下為雷鋒網整理的演講主要文字內容。
華點云專注于高通量基因數據分析的公司，研發了一系列基因高通量生物分析工具，有基于NGS的數據傳輸、分析、報告、解讀為一體的云端協同分析解決方案。這次的公開課則主要講講，如何用云計算模式實現生物信息分析。這次公開課分四部分：
一是生物信息學發展的歷程，以及當前面臨的挑戰。獲取數據的成本越來越低，數據量越來越大，現在的生物信息學面臨的痛點，包括數據傳輸、計算及安全等方面。今天主要講高性能計算的痛點。
二是分析NGS標準的生物信息分析的模式，中間數據處理的格式是怎么樣的。你可能知道，科研單位主要是單樣本分析，時間長且占資源。企業一般是多樣本分析，痛點是NGS分析流程比較復雜，分析時間長，對集成帶來壓力?，F在有兩種計算模式：一種是彈性計算，基本能解決八成的問題；二是分布式計算。
三是云計算模式的特點與優勢。
第四部分會以我們的乳腺癌檢測產品為例，看如何在云端實現生物信息分析流程。
1953年，沃森和克里克提出了DNA 雙螺旋結構，標志著生物科學的發展進入了分子生物學階段，使遺傳的研究深入到分子層次，“生命之謎”被打開，人們清楚地了解遺傳信息的構成和傳遞的途徑。這也開啟了生物信息學的紀元，雖然當時還沒這種叫法。
生物信息學之父是林華安，他提出了Bioinfomatics這種詞。右圖是人類基因組計算，自1990年正式實施，是生命科學的“登月計劃”，也讓生物信息學走向高潮。
人類基因組計劃中有一個關鍵人物克雷格·文特爾，到1997年時整個計劃只完成了3%，但時間和經費都用去了一半多。文特爾說有方法在3年內完成基因組測序，他以一己之力單挑6國科學家，采用“鳥槍法”以更快的速度完成人類。他本想為自己的方法申請專利，但在克林頓總統的要求下和其它6國科學進行了合作。
那什么叫測序？簡單來說昌通過中間的測序儀，可以產生ACTG這樣的數據，而生物信息學就是分析這些數據。
基因測序分為三代。
第一代測序技術的主要特點：優點是測序讀長可達1000bp，準確性高達99.999%，從頭測序，從頭組裝；而缺點是測序成本高，通量低，難以大規模的應用。
第二代測序的特點：大大降低了測序成本的同時，大幅提高了測序速度，維持了高準確性，但序列讀長方面起第一代測序技術則要短很多。
第三代測序的特點：不需要PCR，避免了PCR錯誤的引入，讀長可達3k，且速度快。
目前第二代測序是行業主流，后面的分析也是基于第二代?？偨Y如上圖。
上圖是測序成本的趨勢。在2001年時測一個人的基因組花費近1億美元，而2015年時只需要1000美元。
上圖左側是人基因組個數，右側表示數據量，橫坐標是時間。圖中黑線是真實統計數據，藍色是摩爾定律預測數據，紅線是歷史推測?？梢钥闯?，從2017年開始，每年的基因組數據會呈線性增長。
接下來看下數據量的大小。直接看圖最后的數據，用最新的測序儀，在19-40個小時即會產生167GB到6TB數據，這還只是一臺測序儀。
因此，當前考慮的不是基因測序本身的成本，而是數據傳輸、存儲與分析的成本。目前面臨的挑戰主要包括（公開課主要涉及高性能計算方面）：
數據解讀
大規模的存儲：大規模的存儲： 混亂、缺乏行業標準
大量的計算資源：數據量大，計算復雜，時間長、成本高昂
高效的數據傳輸
安全穩定的運行環境
數據壓縮，這也是行業難點
上圖是NGS行業通用全基因組分析流程。測序后，通過標準化的基因組流程分析，然后與對應的數據庫比對，就能形成標準的分析報告。
而標準的基因分析流程包括：質控，mapping，call SNP，注釋。最重要的是mapping和call SNP，這是指它們對計算要求是非常高的。
AC和Trime是質控，當得到測序數據后，通過這兩步把低質量數據去掉。mapping是指整個染色體數據拼成一條。最后就是去找突變位點在哪，找到定位后即可評估是什么樣的病種，給出一個應對措施。
接下來看看每個階段對應的數據格式是怎么樣的。從QC到Trime都是FastQ格式，具體如上圖所示。接下來會形成FastA格式。而通過mapping會再形成bam/sam格式。sam實質還是文本文件，只是對文件格式的定義；bam文件是對sam文件的二進制壓縮，占用存儲，后續處理速度快。通過call SNP則會生成文本。
接下來以微生物組學為例看NGS數據計算特征。如上圖所示，微生物組學中，呈現單個樣本數據量小、樣本數量多，及單個樣本數據量大，樣本數量少等特征。同時看到，微生物組學與參考序列的比對過程中，計算量大。微生物組學全基因組數據的組裝和聚類，對內存的消耗也很大。海量樣本微生物組學數據的比較，也需要高IO。所以可以看到，整個NGS數據是計算密集型，內存密集型，IO交換密集型。
當前行業生物計算的業務場景是：
1.單樣本數據量小，樣本量很大：應該用彈性計算模式，能解決八成的需求。
2.單樣本數據量大，樣本量很?。翰捎梅植际接嬎隳Ｊ健?/p>
3.單樣本數據量大，樣本量較大：彈性+分布式計算模式。
云計算的特點與優勢
整個云計算企業主要分為IaaS、PaaS、DaaS、SaaS。在云計算下整個醫療與健康廠商的劃分如上，其中包括了各主要服務商。
云計算整個特點是：
成本低，以前完成一百個樣本可能需要幾萬元，現在已經降到幾元了。
彈性，即可以動態伸縮，滿足動態的用戶增長的需要。
以及高可靠性、通用性、虛擬化和超大規模等特點。
站在生物信息云端
第四部分最為重要，主要關于如何用云計算解決生物信息分析中存在的問題。
首先是“單樣本數據量小，樣本量大”的業務場景云端實現，這主要用彈性計算來實現。
上圖是以乳腺癌檢測應用為例，它基本代表整個NGS標準的分析流程。數據特點是單樣本100M，有100個樣本。
傳統SGE集群計算模式單樣本運行時間約15分鐘，共約22小時，而我們的目標是15分鐘全部完成。實現彈性計算，要要求業務需求選擇云廠商，這里只需要從IaaS上選擇即可。
先看百度云，它提供批量計算。上圖是百度技術架構圖。第一步是先把數據傳到對象存儲BOS中，之后把作業投到Batch Compute計算集群里面。
再看下阿里云，它也有Batch Compute計算模式，也適用于并行批處理作業的分布式計算。AWS由于網絡問題，不太好用。
下面以阿里云為例，講解如何去對Rocky.pl做彈性計算。做彈性計算，是讓機房中的多臺機器同時運行，把結果寫到指定的OSS里。我們的任務寫一個程序，快速讓它在機房創建一排排機器（VM1-100），每個VM運行Rocky.pl，輸入與輸出都放到OSS上。這就是主要思路。
在寫程序前，要做四件事，一是做環境搭建，二是把現有測試數據傳到OSS上，三是正式寫程序，四是查看測試結果。
環境搭建第一步是創建虛擬機，讓它運行rocky.pl的話，要先做鏡像。例子中搭建的是CentOS6.5，當然這可根據需求自行決定，另外就是安裝生物信息流程包。通過鏡像可擴展100臺機器。
第二是準備開發工具。這里以Java為例，需要的環境是jdk與eclipse。
準備工作完成后，要把數據傳到OSS。剛才有三個文件，首先要將它們傳到OSS。上傳方式如上圖所示，可以通過網頁形式，或SDK的方式。
OSS中有幾個概念。
一是bucket，即存儲空間，用于存儲對象（Object）的容器，所有的對象都必須隸屬于某個存儲空間?？梢岳斫獬蓋indows下的C盤、D盤。
region是指地區，根據自己所在地域決定。
頁面開發人員的SDK方式如上所示，需要輸入賬號密碼，創建OSS客戶端。具體細節不再詳細展開。
接下來可通過SDK和控制臺的方式查看是否上傳成功。網絡不穩定的情況下可選擇斷點續傳。
下一步是寫一個小程序，通過封裝一步步實現彈性計算。做之前，要準備節點，讓jar包中代碼使用這個節點，這里會用到前面準備的鏡像，并配置節點。然后是開發jar包，分別要構造job對象，構造DAG對象，構造task對象，以及OSS與節點的映射關系，最后封閉job的其他對象，并啟動job。
這里有幾個名詞要解釋。
job（作業）是BatchCompute的名詞，每次分析操作都可以看成是一個作業。比如說我們要分析100個樣本數據，那么當我們將100個樣本當成一個整體，只需要執行一次，那么job就是1個。如果將這100個樣本拆分成多個組，每組N個（N<100），那么就會有M個job（M=100/N）。例如每組5個樣本，總共拆分成20個組，那么job個數就是20。
DAG是directed acycline praph的縮寫，即有向無環圖，通過它可以把業務流程切分成小的節點。
任務（task）也是BatchCompute的名詞，是業務流程。我們可以將業務流程細分成N份，那么就可以有N個task。如果僅僅使用粗糙的業務流程，那么task設定成1即可。另外，每個job可以包含多個task，每個task單獨用1臺計算節點。
OSS與節點的映射關系，是將OSS上的數據掛載到節點上，以后此節點上的任何操作都是讀取本地目錄上的數據。這么做的好處在于減少了頻繁和OSS進行交互，防止交互過于頻繁，掛載連接斷掉。而這種方式只需要最后關閉節點的時候，才和OSS交互。
原始DAG的缺點是，每臺計算節點運算時間很短，但是等待資源時間很長。一般情況下，每個節點資源需要等待3-5分鐘，而計算的時間可能僅僅幾十秒。總的運行時間可能達到20分鐘。
所以，一個想法是在一個task上運行所有步驟。要這么做，其中的步驟會如上圖所示。
偽代碼則如上所示，具體不再詳細展開。程序非常簡單，也有python和java等各個版本。
前面講述的是一個job的運行流程?，F在我們有100個樣本，每個task運行2個樣本，那么共需要50個task，每個task對應1個job，那么就需要50個job。測試階段，我們可以使用for循環，執行50次。每個都運行一次job。偽代碼如下：
for (int i = 1; i<=50; i++ ) {
//運行job
}
實際應用中，我們是通過一個調度系統，來判斷當出現2個樣本數據時，則創建一個job，并啟動job，讓這個job運行1個task，每個task里面執行2個樣本數據。當有100個樣本數據時，我們會啟動50次job。偽代碼如下：
//1.調度器發現有2個樣本
//2.1構造job對象
//2.2構造task對象
//2.3將2個樣本 set到task對象中
//3.創建job并啟動
上圖是真實測試數據，藍色是開始時間，黃色是結束時間。可以看出，總耗時8分鐘，費用是3元（阿里 云結果）。
用彈性計算方式，有兩個問題。頻繁對OSS讀寫，會造成OSS掛掉；另外，彈性資源有限制 ，比如阿里云限制是300臺機器。
接下來是單樣本數據量大，樣本很小的業務場景，這又應該怎么去做呢？
再來看一下之前出現過的這一張圖。如果單樣本數據量大，相對它進行加速，不適用彈性計算，必須對NGS流程中的算法進行優化（如各流程中所示）。
再來看看國際上，針對分布式計算的研究進展。Spark是伯克利大學的研究結果，而它還有一個ADAM的團隊，它專門用于生物信息計算。Google有自己的Google Genomics，而英特爾、斯坦福和微軟則是基于GATK進行加速，不過目前還沒有成型。
國內目前沒看到對生物信息用的算法進行加速，我們現在對NGS分析流程，基于分布式計算實現了加速。我們在fastQC、Trime、call SNP上都有進展。
最后介紹一下彈性分布式計算的架構圖應該是怎么樣的。底層是公有云，在這些IaaS上，我們會搭建一個NGS的IaaS層，把適合于HPC、Spark、Graph的集群通過轉換器封裝起來成一個計算模式，同時把OSS、SSD等封裝起來（DataHub），為上層的PaaS服務。
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